凍存管凍存步驟

1.收集細(xì)胞：按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于離心管中。貼壁細(xì)胞需先用胰酶等消化液消化使其脫離培養(yǎng)瓶壁，然后收集；懸浮細(xì)胞可直接收集。

2.計(jì)算細(xì)胞數(shù)：按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)，一般細(xì)胞密度為(5×10^-5×10^cells/ml)。

3.離心收集細(xì)胞：取所需數(shù)量的細(xì)胞懸浮液于離心管中，以(1000-2000rpm)，在(4℃)下離心(3-5)分鐘，離心后移去離心管中的上清液，留下細(xì)胞沉淀。

4.重懸細(xì)胞：加入適量的CellWorld無血清快速細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度達(dá)到(5×10^-5×10^cells/ml)，緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液。

5.分裝細(xì)胞：將細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記好的冷凍管中，標(biāo)記內(nèi)容包括細(xì)胞名稱、凍存日期等重要信息。

6.凍存細(xì)胞：將凍存管直接放入(-80℃)冰箱，可長期冷凍保存。若需要液氮保存，第二天可將凍存細(xì)胞從(-80℃)冰箱轉(zhuǎn)移至(-196℃)液氮罐中。

細(xì)胞培養(yǎng)板原位凍存步驟

1.吸棄上清：從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈。

2.加入凍存液：加入適量CellWorld無血清快速細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)孔板中，要充分浸潤細(xì)胞。

3.密封培養(yǎng)板：蓋上蓋板，做好密封措施，防止染菌。

4.凍存培養(yǎng)板：直接將含凍存液的細(xì)胞培養(yǎng)板放入(-80℃)以下冰箱，長期冷凍保存。